[問題] western blotting壓片時的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (看不見的真實)時間19年前 (2006/09/28 20:23), 編輯推噓8(803)
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最近 壓片的時候發現 壓出來的 常是空白片 原本以為真的是空白的 但是 後來才發現 原來是ECL加進去後 decay太快 所以 每次在ECL作用後 在暗房 可以看到membrane上該有的位置 有很亮的光 但是 當我把底片拿出來後 就可以看到 那個"光" 很快的就消失了 = =" 然後 就壓不出東西了 如果動作再快一點 其實 是可以壓出很黑的band 但 是 儘管我的動作再快 壓完一張 就沒法壓第二張了 所以 就得再重加ECL.... 原本以為是ECL有問題 但 買了新的 還是同樣的情形 用不同的一抗 也一樣 會是二抗嗎? (好像也有換過 我明天再確定看看) 因為這個星期 所有的結果都是這樣 > <" (之前不會這樣) 還是wash buffer有問題呢 請問 有人有好的建議 或覺得是那個步驟出了問題呢 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.104.78.194

09/28 22:45, , 1F
ECL你是用哪家的?
09/28 22:45, 1F

09/28 22:46, , 2F
我的, 都還可以O/N再壓, 當然時間要拉長些..
09/28 22:46, 2F

09/28 23:05, , 3F
ECL有問題吧!建議用PIERCE或是AMERSHAME或是MILLIPORE
09/28 23:05, 3F

09/28 23:35, , 4F
二抗濃度會不會太高? 1:2500? 1:5000?
09/28 23:35, 4F

09/29 00:22, , 5F
有可能是二抗太濃
09/29 00:22, 5F

09/29 01:51, , 6F
不要用Santa Cruz ECL 壓一次壓不了第二次
09/29 01:51, 6F

09/29 16:08, , 7F
我也建議不要用Santa Cruz的ECL....decay超快的..
09/29 16:08, 7F

09/29 16:09, , 8F
雖然比較便宜.不過真的很爛..建議用騰達行的PIERCE 的ECL
09/29 16:09, 8F

09/30 00:15, , 9F
我用的是伯森的
09/30 00:15, 9F

09/30 00:15, , 10F
二抗的話 從1:2000~1:4000都有試過 情況好像一樣
09/30 00:15, 10F

10/01 15:40, , 11F
伯森ECL 算很好了 應該有一小時以上
10/01 15:40, 11F
文章代碼(AID): #156xwz7m (Biotech)
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