Re: [問題] western blotting壓片時的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (jgoing說)時間19年前 (2006/10/01 02:32), 編輯推噓5(501)
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你的狀況絕對不需要更靈敏的ECL 貴且無法解決問題 誠如linker072與jsi兩位所言 你的二抗濃度太高是造成訊號很快消失的主因 建議你做到1:10000應該都沒有問題喔 是用NEL105的話 很多人都覺得抗體下太少而心有不安 其實這種想法是很有趣的^^ ※ 引述《licary (看不見的真實)》之銘言: : 最近 壓片的時候發現 壓出來的 常是空白片 : 原本以為真的是空白的 : 但是 後來才發現 原來是ECL加進去後 decay太快 : 所以 每次在ECL作用後 在暗房 可以看到membrane上該有的位置 : 有很亮的光 : 但是 當我把底片拿出來後 就可以看到 那個"光" : 很快的就消失了 = =" 然後 就壓不出東西了 : 如果動作再快一點 其實 是可以壓出很黑的band : 但 是 儘管我的動作再快 壓完一張 就沒法壓第二張了 : 所以 就得再重加ECL.... : 原本以為是ECL有問題 但 買了新的 還是同樣的情形 : 用不同的一抗 也一樣 : 會是二抗嗎? (好像也有換過 我明天再確定看看) : 因為這個星期 所有的結果都是這樣 > <" (之前不會這樣) : 還是wash buffer有問題呢 : 請問 有人有好的建議 或覺得是那個步驟出了問題呢 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 219.84.131.203

10/01 08:52, , 1F
原來是這樣阿,我家老闆都說是protein沒收好
10/01 08:52, 1F

10/01 08:55, , 2F
嗯 謝謝 我試試看 :)
10/01 08:55, 2F

10/01 14:25, , 3F
membrane 上有咖啡色一塊嗎???訊號可能太強了
10/01 14:25, 3F

10/01 20:07, , 4F
為何不先與別家借ECL試試看!你的二抗已經濃度很高了!
10/01 20:07, 4F

10/01 20:08, , 5F
這是我的感覺.Decay太快不太可能是二抗的關係!
10/01 20:08, 5F

10/04 00:24, , 6F
二抗與ECL的關係是酵素反應,二抗太濃當然會影響反應的時間
10/04 00:24, 6F
文章代碼(AID): #157hX5Kw (Biotech)
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