Re: 請問RT-PCR
看板Biotech (生命科學)作者mandible (生化...go go go !!)時間19年前 (2006/10/25 23:44)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串4/4 (看更多)
※ 引述《anidiot (^__________^)》之銘言：
: ※ 引述《elgase (夏生桂和)》之銘言：
: : 要做semi-qPCR事前要先check很多細節,如果能上real-time PCR會比較單純一點
: 老師是希望在上機之前
: 若能跑gel看到差異還有調好condition再去做real time
: 不過我今天跑了可以看到band
: 接下來應該就會去做real time
: 謝謝大家的意見 ^^
: : 我以前的經驗是,如果你RT用的total RNA總量有1ug,actin大概在23個cycle就
: : 可以在膠上看到band,至於interesting gene的band,那就case by case,要看它本
: : 身在tissue內的表現量.
這樣跑很累..
因為到Qpcr的system許多問題要考慮
1.primer concentration
2.primer dimer
3.cDNA concentration
4.pcr product molecular weight
不過..我之前也是花了很多時間再跑traditional RT-PCR
建議你可以跑跑看 cycles看看(20-25-30-35 cycles)等等
希望有給你幫助
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