[問題] 關於Semi-Dry transfer system 問題

看板Biotech (生命科學)作者threestars (等待)時間19年前 (2006/12/21 23:43)推噓0(0推 0噓 0→)

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我們實驗室主要使用semi-dry transfer system 配法主要是 5.82克的 tris 2.93克的 glycine 3.75ml的 10% SDS 200 ml的 methanol 加水至1L 廠商建議的電壓是30V 10分鐘或15V 15分鐘或 10V 30分鐘想請教幾個問題，不知是否有人有經驗 1.methanol的量高於20%，會不會使得大分子的蛋白質轉不過去 2.SDS-PAGE 的%越高，是不是越難transfer 3.跑100kd以上的蛋白，transfer的電量是否要較高? (ex: >15V ) 我知道如果methanol低於20%的話，不易使小分子的蛋白transfer 但是我們實驗室因為methanol是一大桶的，用到最後揮發很嚴重無法準確的確認methanol的濃度所以我配製的時候，都稍微高於200ml 我發現小分子都被轉過去了，但是大分子都還留在膠上我以前常跑7.5%的膠，transfer大約15V 15分鐘都可以完全transfer過去最近常發現我使用高於12%或10%的膠，常常會發現transfer不完全的現象我不知道是什麼緣故，如果是methanol揮發掉的話，電壓應該會跑不上去但是現在電壓正常運作，卻無法完全transfer到我的memberance上面這些情況都是偶發性的，所以我懷疑是methanol的問題，還是SDS的問題? 因為glycine 跟tris 都是powder，應不會有存放上的問題謝謝撥空看完我這麼長的敘述! 是否有人遇到與我相同的經驗? 現在開始考慮回去用濕式transfer了... 最近居然還有全乾式的transfer推出了 -- 如果活在世上只是扮演著大家所期望的自己那扮演好了又怎樣不如靜靜的讓自己消失吧總是多餘的存在只是種荒謬的錯誤 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.164.150.98