Re: [問題] 關於Semi-Dry transfer system 問題

看板Biotech (生命科學)作者u921645 (her)時間19年前 (2006/12/23 02:08)推噓1(1推 0噓 0→)

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※ 引述《threestars (等待)》之銘言： : 我們實驗室 : 主要使用semi-dry transfer system : 配法主要是 5.82克的 tris : 2.93克的 glycine : 3.75ml的 10% SDS : 200 ml的 methanol : 加水至1L : 廠商建議的電壓是30V 10分鐘或15V 15分鐘或 10V 30分鐘我們都是看電流算法是membrane面積*9/7ma 只看電壓的話若沒電流就是斷路了 (我通常用8*7cm左右的大小) 大概1~2HR : 想請教幾個問題，不知是否有人有經驗 : 1.methanol的量高於20%，會不會使得大分子的蛋白質轉不過去這我不知耶 : 2.SDS-PAGE 的%越高，是不是越難transfer 對 : 3.跑100kd以上的蛋白，transfer的電量是否要較高? (ex: >15V ) : 我知道如果methanol低於20%的話，不易使小分子的蛋白transfer : 但是我們實驗室因為methanol是一大桶的，用到最後揮發很嚴重 : 無法準確的確認methanol的濃度 : 所以我配製的時候，都稍微高於200ml : 我發現小分子都被轉過去了，但是大分子都還留在膠上 : 我以前常跑7.5%的膠，transfer大約15V 15分鐘都可以完全transfer過去我做15%or 12%的, 最大的marker也通常transfer 不過我覺得還好因為會用這麼高的濃度通常也都是看較小的分子 : 最近常發現我使用高於12%或10%的膠，常常會發現transfer不完全的現象 : 我不知道是什麼緣故，如果是methanol揮發掉的話，電壓應該會跑不上去 : 但是現在電壓正常運作，卻無法完全transfer到我的memberance上面 : 這些情況都是偶發性的， : 所以我懷疑是methanol的問題，還是SDS的問題? 我覺得是transfer的時間或強度不夠才會小的分子可以大的不行要特別注意電流和電壓 : 是否有人遇到與我相同的經驗? : 現在開始考慮回去用濕式transfer了... : 最近居然還有全乾式的transfer推出了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.164.105.18