Re: [問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
※ 引述《boyo (29大頭)》之銘言：
: ※ 引述《studyno1 (汲取知識)》之銘言：
: : 我養的是MEF cell 今天早上subculture
: : 剛剛看了一下 發現我沒有把細胞均勻分布在dish中
: : 所以有些區域細胞較多 有些就很少
: : 我的方法是先將適當體積的medium 加在dish
: : resuspend trypsin作用後的cell後 再依適當的spilt ratio
: : 取出細胞液加在剛剛有medium 的dish 然後前後左右搖晃dish 讓細胞均勻分布
: : 可是顯然這樣的方法無法讓細胞很均勻分布 猜測可能我過度搖晃 反而讓細胞不均勻
: : 我的問題是
: : (1)早上subculture 現在看來細胞已經貼了
: : 我可以今天晚上再把細胞打起來讓他分布均勻嗎? 對細胞會不會造成影響?
: : (2)可以請大家提供一下subculture後讓細胞均勻分布於dish的方法嗎?
: : 謝謝回應^^
: MEF是mouse embryonic fibroblast吧
: 你的作法是不是漏了一步??
: MEF大部分的用途是用作ES cell的feeder
: 所以MEF貼dish貼平均非常重要 貼不平均你的ES cell就很容易分化
: 你加medium的用途是要inactivate trypsin的作用
: 加完後要用pipet把dish上的細胞沖乾淨
: 再吸到15cc tube "pipet幾次 打散細胞" <--你是不是少這步驟
^^^^^^^^^^^^^^^^^^^請問這步驟是specific for MEF 嗎?
從大學到碩班 老師學長姐教subculture都沒有這個步驟耶
都是加完trypsin-EDTA後RT靜待一下(或放incubator一會兒) 然後輕拍dish
或是直接用pipet把細胞沖下來 收集細胞液到離心管就直接離心了耶
我只有這個步驟不太一樣 其他都相同
加了這步驟的目的是什麼?
: 打散完後再去離心 算準要passage多少細胞後
: 吸去廢液 再加medium去pipet打散pallet
: trypsin-EDTA的作用是只是化學性的 你也要加一些物理性的作用
: 就是用手打散細胞
: 十字搖勻的 看你的步驟應該沒問題 不過記得搖的時候
: 前後搖完 要等液面不再晃動再左右搖 不然細胞都在原地散步
: 有問題再問吧
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