Re: [問題] subculture後,cell在dish上分布不均勻
MEF我有養過
提供一下我passage的方法給你參考看看
先倒掉medium後用PBS wash，10cm dish加1 ml 0.25%trypsin-EDTA 放置incubator
中作用2min，再加至少等量的medium去中和trypsin的作用，吸至50ml tube中離心，
去除trypsin,雖然meduim可以中和掉trypsin的作用，但其中和作用時間多長並不清楚，
所以習慣上我都會把trypsin離掉，離心完到掉上清液之後先加入1ml medium，
用tip去pipe，把細胞打散後再加入19ml medium，這樣可以分兩盤，然後要分到dish
之前再用吸管pipe均勻，這樣細胞就可以長得很好囉!!這是我的方法，希望對你有幫助
※ 引述《studyno1.bbs@ptt.cc (汲取知識)》之銘言：
> ───────────────────────────────────────
> 我養的是MEF cell 今天早上subculture
> 剛剛看了一下 發現我沒有把細胞均勻分布在dish中
> 所以有些區域細胞較多 有些就很少
> 我的方法是先將適當體積的medium 加在dish
> resuspend trypsin作用後的cell後 再依適當的spilt ratio
> 取出細胞液加在剛剛有medium 的dish 然後前後左右搖晃dish 讓細胞均勻分布
> 可是顯然這樣的方法無法讓細胞很均勻分布 猜測可能我過度搖晃 反而讓細胞不均勻
> 我的問題是
> (1)早上subculture 現在看來細胞已經貼了
> 我可以今天晚上再把細胞打起來讓他分布均勻嗎? 對細胞會不會造成影響?
> (2)可以請大家提供一下subculture後讓細胞均勻分布於dish的方法嗎?
> 謝謝回應^^
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