[問題] 使用Urea deaggregation後回收率?

看板Biotech (生命科學)作者ronall (暱稱小公主的!扣十分先)時間18年前 (2007/08/29 00:03)推噓0(0推 0噓 4→)

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抱歉小弟又來請教各位了小弟純化蛋白後發現蛋白有aggregation的現象我擔心這會影響我的蛋白產率所以想使用Urea去deaggregation 之後想使用透析的方式除去Urea 我想問的是 refolding回來且為正確結構的蛋白能有多少? 因為我有問過我家的博士後他跟我說別將urea處理後的蛋白混在正常結構的蛋白中他認為refolding的結構不確定正確與否必須經由CD去鑑定不知各位有什麼樣的想法呢? ==========================細節說明討論發起線================================== 先感謝各位大大的回應包含前面用水球丟了我好幾次的大大我想就我的想法說明好了確實當"產量"夠的時候 (產量定義為足夠我進行實驗的用量) 我確實是不需在乎aggregation的部分但是當我產量不夠的時候我必須額外再生產一批 (不含等待的純工作天約14天) 因此小弟在評估從沉澱中將aggregation作denature並使其refolding 這樣的方式在時間上以及程序上是否比較有利? 然我的實驗室並沒有人做過這樣的實驗我想問的是博士後認為我必須將urea處理的沉澱與上清液的正常蛋白分開處理因為他覺得refolding miss的機會很大所以認為我必須分開處理後再以CD或其他方式去鑑定結構但我認為我知道refolding miss的機會存在但也不能否定正常foding蛋白的存在同時我實驗用的蛋白其Apo-,Holo-兩種構型僅有些許不同 PI值分別為3.2, 3.3 PI值差距這麼小的情況下能夠以Q-sepharose分離那麼 folding miss的蛋白我認為應該也能夠被分離既然能被分離那為何我還必須獨立處理這個部分呢? 這個部分是我最想知道的感謝各位囉^_^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.225.207.88