Re: [問題] 如何去除使用urea去作蛋白的deaggregation

看板Biotech (生命科學)作者fosca (沒故事聽 NNNN)時間18年前 (2007/08/29 20:10)推噓1(1推 0噓 1→)

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※ 引述《ronall (暱稱小公主的!扣十分先)》之銘言： : 餓死抬頭 : 想請教眾高手們 : 小弟使用E.coli生產突變用蛋白 : 突變蛋白上接了一段CBP-Taq : 純化後去鹽濃縮並以水回溶　==>盡量不要用水回溶，蛋白質溶解需要鹽分喔 : 但總是會有些沉澱 : 我認為那是蛋白的aggregation 蛋白質會aggregation可能是有些疏水性的區域暴露在蛋白質表面，可能是(1)E.coli表現蛋白時，沒有摺疊100%正確。　先建議在利用E.coli表現蛋白時降低溫度，轉速，inducer含量。也可能是(2)你的蛋白本身表面就含比較多疏水性的區域，有很多binding site等等建議你可以在純化過程中加入ㄧ些清潔劑;如Triton X-100，它會吸附在疏水性區域，使蛋白質溶解度上升。當然加入清潔劑前提是它不會影響你的後續實驗，而清潔劑加入的最大比例你可以問問辜狗大神。另外也可以加入Glycerol，PEG等等藥劑；看過最扯的是這篇A Simple Method for Improving Protein Solubility and Long-Term Stability J. AM. CHEM. SOC. 2004, 126, 8933-8939 9 8933。那篇作者說加入L-Arg and L-Glu at 50 mM可以提高8.7倍蛋白溶解度。哈哈，你可以試看看再來和版友們說好不好用。其實超多藥劑可以試看看，問辜狗大神就OK拉。最後建議不要試refolding，那真是噩夢。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.132.101