Re: [求救]IHC的background消不掉
就個人的經驗而言：
在試新條件時，我都會同時作一片negative control
此negative control的定義是，利用相鄰的切片(或位置儘量不要差太遠)，
不加一抗(只用diluent)，或加與一抗相同來源的IgG取代一抗進行incubation
其餘步驟均與原定的步驟相同(包括IgG的稀釋比例,ABC,二抗呈色...等)
這個control的染色結果，可以讓我大概抓到非一抗本身導致的背景問題
我不曉得原po目前是否有類似的control做比較?
個人認為多設計control實驗對改善IHC結果頗有幫助^^
之前提到biotin的問題，
是源自使用ABC方法
因為動物組織中也會有內生性的biotin等，
尤以某些組織更明顯，我聽到比較多的像是腎臟,肝臟或腸道
至於你所用的心臟組織我就不清楚了，
如果最後發現可能是biotin-avidin的問題，
那biotin avidin的blocking就不可或缺了
針對這種狀況，目前有多種廠商販售ready-to-use blocking reagent
你可以再查詢看看
另外,如果懷疑的問題出自一抗造成訊號過強
我目前想到的處理方法可能有以下兩種:
1.不變一抗稀釋比例,而直接除去ABC這個方法,改使用HRP二抗,
(當然biotin avidin blocking就不用了)然後直接呈色
2.減低一抗濃度,其餘步驟不變
如果試出來效果差異不大,我往後會使用方法2,因為可以省一抗^^",
但如果希望省時間,我往後會用方法1(雖然省下時間也不多啦^^")
希望以上心得能提供你參考用
也希望大家能多多給意見嘍!
希望板上能多一點對IHC的討論
IHC是很有趣的實驗方法^__^
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