Re: 切膠回收做PCR

看板Biotech (生命科學)作者reteporeh (颱風也喜歡放假)時間18年前 (2008/01/06 22:51)推噓5(5推 0噓 11→)

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謝謝大家的回覆因為我目前的問題在於說切膠回收後的產物無法再次PCR出來而第一次PCR的產物跑膠是有major band的只是將major band切膠回收後再次PCR完後,跑膠卻跟L大的情形一樣沒有band的出現所以我想要知道的是否在回收的產物再次進行PCR是否有什麼地方要特別注意的 ps..而s大所說的情形似乎跟我的有點不太一樣,所以那些因素應該都可以初步排除 ※ 引述《sGoat (無三小羚羊)》之銘言： : ※ 引述《reteporeh (颱風也喜歡放假)》之銘言： : : 想請問板上的各位 : : 有將PCR產物做膠回收然後再進行PCR嗎? : : 目前遇到的情形是 : : 膠回收完的產物再進行相同條件PCR時 : : 在跑膠確認時,沒有看到任何的band : : 重複做過幾次,情形依然 : : 想請問在做完膠回收後 : : 再進行PCR時 : : 有什麼條件特別要求的嗎? : : PS..膠回收是使用Kit做的 : sorry... : 我的意思是為什麼要在PCR完之後跑膠回收"再跑一次PCR"... : (膠體回收也要看的到產物在哪裡吧?純粹猜測位置再切膠回收要是沒產物不就做白工?) : 假使你的primer設計得夠專一的話... : 單純考慮擴增量不夠... : 將你的PCR產物稀釋50倍之後再以同一組primer進行PCR擴增... : (甚至是使用更專一的Nest primer擴增) : 就能將你第一次沒被放大到可見程度的產物再放大一次... : 一直持續到你所要的產物被放大到你要的量... : 假設是擴增要進行ligation的片段... : 那你的RE切位一定設計在primer上... : (此句修正,要外加切位才是在primer上) : 在沒有產物的情形下,為何不先考慮PCR是否成功? : 再假設你進行了PCR擴增ligation的片段... : 你得到了產物,你將產物以RE切過了 : 跑了膠回收完,你想要確認回收到的是不是你要的片段... : 因此以相同的primer又跑了PCR想說要是同樣的東西應該有東西會P出來... : 可是你的template上primer相對應的黏接位置已經被你用RE切掉了... : 那你怎麼能夠預期PCR能夠P出東西來呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.129.166.142

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tsubasawolfy

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NKTcell

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