[問題] 關於restriction enzyme digest

看板Biotech (生命科學)作者 (啦啦啦....)時間18年前 (2008/02/20 02:26), 編輯推噓5(501)
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想請問大家 我現在用EcoR1及HindIII將vector及insert做RE digest 做ligation之後長出來的怎麼挑colony卻都是vector的size 懷疑是vector沒有切乾淨 (我是取5ug 切2小時) 之後做gel purify 問題是兩個enzyme切下來的片段距離很小 只有20-30bp 使我無法在跑膠時確認是否切乾淨 不知道有沒有其他辦法可以確認 或是實驗步驟需要改進的地方 感謝大家! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.115.51.145

02/20 03:43, , 1F
需要over digestion, 最好各個EZ分開reaction.
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02/20 12:39, , 2F
5ug會不會太多?
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02/20 13:24, , 3F
vector加作CIP避免self ligation
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02/20 13:41, , 4F
linear和circular form的vector是分的開的
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02/20 15:17, , 5F
PCR可以確認
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02/21 00:57, , 6F
謝謝大家的回答~~我再繼續努力
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文章代碼(AID): #17knzi-U (Biotech)
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