[求救] 小片段的DNA分離

看板Biotech (生命科學)作者 (成長)時間18年前 (2008/02/20 14:20), 編輯推噓2(207)
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我要分離小片段的DNA(約六百多bp) 使用洋菜膠跑電泳來分離 之前使用的是 1%或1.4%的濃度 用17V跑大約18個小時 但是 當把band切下來純化出DNA後 再去跑電泳測試純不純時 往往都不乾淨 於是就要再純化個第二次第三次 到最後東西都沒了~~~~~ 所以想請教一下 這種小片段的DNA 用多少濃度的gel 多小的電壓 可以較容易分離到呢???謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.52.129

02/20 14:30, , 1F
我用1.2%的gel~100V就可以分開! 18個小時會不會太久了~
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你再用電泳跑一次...濃度不是已經很低了!應該會越跑越淡~
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02/20 14:48, , 3F
是可以分開 可是純化就不是很乾淨 單條band
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02/20 14:49, , 4F
再跑一次電泳只是拿一點點去測測看~~~
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你用什麼方法純化band DNA? 通常切band得到的DNA已經夠純
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如果你還拿到多個產物 可能 1.原來digestion不完全
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2.你的DNA sequence會產生dimer 或有inverted repeat
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可以試著將純化產物重新anneal,或是用enzyme切
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02/22 02:13, , 9F
看能不能拿到預期大小的product
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文章代碼(AID): #17kyR9z7 (Biotech)
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