Re: [求救] 小片段的DNA分離
※ 引述《hsd0 ()》之銘言：
: ※ 引述《umbrally (成長)》之銘言：
: : 我要分離小片段的DNA(約六百多bp)
: : 使用洋菜膠跑電泳來分離
: : 之前使用的是 1%或1.4%的濃度
: : 用17V跑大約18個小時
: : 但是 當把band切下來純化出DNA後
: : 再去跑電泳測試純不純時 往往都不乾淨
: : 於是就要再純化個第二次第三次
: : 到最後東西都沒了~~~~~
: : 所以想請教一下 這種小片段的DNA
: : 用多少濃度的gel 多小的電壓
: : 可以較容易分離到呢???謝謝
: 能不能稍微一下這個600多bp的DNA是什麼之後的product呢?!
: 因為其實不太懂您所說的"不乾淨"是什麼意思
: 是指做完純化之後check會有其他的band嗎??
: 還有我想請問一下你跑的是多大片的膠呢 是普通像是名片的寬度的gel嗎??
: 因為聽你說用17V跑感覺上不像是一般實驗室那種只有50V或是100V的規格
這個片段是原本接在puc18上
用限制酵素切出這個片段之後
用11cm*14cm 的膠 17V跑
然後照膠的時候看起來我要的片段已經和puc18分開
所以可以把我要的片段的那條band切下來
之後純化 可是純化完 再取一點點去測試純不純
就會發現上面還有其他的band 就是我說的不乾淨
於是就還要再去跑膠 再去切band 純化
重複好幾次check看起來才會是很乾淨的單band
但是這樣 濃度就變的很低 不太夠
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◆ From: 140.112.52.129
推
02/21 12:31, , 1F
02/21 12:31, 1F
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