[討論] SDS-PAGE用的LAEMMLI buffer成份過濃....

看板Biotech (生命科學)作者LIAR (墮天使)時間18年前 (2008/03/24 22:51)推噓0(0推 0噓 1→)

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我從暑期課、GOOGLE、其他實驗室protocal粽何western的配方，其中Laemmli sample buffer中固定有這幾項： SDS 帶負電、unfolding 2-ME 解S-S glycerol 方便sample下沉 bromophenol blue 看跑的進度 tris-HCL 穩定pH 所以看起來glycerol和dye比例應該可以變動大一些，但我找到2X、4X、6X的配方後回推到1X時所有的濃度，發現除了glycerol=10%、2-ME=5%比較固定，反而其他的配方大家都不一樣。我之所以注意到是因為當我要把2X直接換算到6X，卻發生glycerol佔掉60%，結果 SDS的12%沒有足夠的水可溶。所以我推測6X應該會把一些東西的濃度調降。不過要降也不能降太低，不然我猜會發生unfolding不完全、S-S沒解完，pH跑掉的現象，所以我想請問一下各別成份的最低作用濃度應該要多少呢？別的實驗室認為1X工作濃度SDS 1%就夠了，tris則是20mM~50mM，請問這樣合理嗎？那其他配方又如何呢？ -- 太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.3.78