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[求救] western 轉印的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (你今天yanzi了嗎)時間18年前 (2008/03/24 22:40), 編輯推噓4(4推 0噓 10→)
留言14則, 5人參與, 最新討論串1/1
各位晚安 我最近在做western,但是常常在transfer這一步有問題 每次都會跑過頭(PVDF上的某些地方變的有點透明),然後看不到MARKER 我試過幾個參數 125mA跑overnight(放4度C冰箱) 80mA跑overnight(放4度C冰箱) 250mA跑兩小時(放室溫,但是周圍有用冰磚圍著) 而且在轉印槽裡面,都有放專用的冰盒 但是每次都會有一樣的問題,也不知道是哪邊出問題 今天有人建議說用120V跑30分鐘試試看 不知道版上的各位有什麼建議呢? 謝謝 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.21.135
推
03/24 22:53, , 1F
請問PVDF跑過頭會透明啊？
03/24 22:53, 1F
→
03/24 22:53, , 2F
另外不是要看面積換算電流嗎？我們是1.5mA/cm2
03/24 22:53, 2F
推
03/25 03:31, , 3F
是可以算啦不過一般都會偷懶的XD..
03/25 03:31, 3F
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03/25 03:31, , 4F
你的參數設定都跑太久了啦..overnight就用10V就夠了
03/25 03:31, 4F
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03/25 03:32, , 5F
250mA頂多一個小時左右..當然跟你目標的protein大小有關
03/25 03:32, 5F
推
03/25 04:44, , 6F
我們家 6*9 cm2 的 29 mA 4 度跑 overnight
03/25 04:44, 6F
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03/25 04:44, , 7F
400 mA 就跑 1 小時~ SDS-PAGE 12.5% 上的 marker
03/25 04:44, 7F
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03/25 04:46, , 8F
除了有的時候最大的還會有點殘留外 幾乎都會留在膜上~
03/25 04:46, 8F
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03/25 04:47, , 9F
另外我們家是 BIO-RAD 的~~ 給你參考囉^^
03/25 04:47, 9F
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03/25 10:00, , 10F
非常非常感謝樓上各位大大...我們家也是BIO-RAD的^^
03/25 10:00, 10F
推
03/25 11:17, , 11F
請問你放PVDF membrane之前有用methanol浸濕嗎?
03/25 11:17, 11F
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03/25 11:19, , 12F
看你那症狀還挺像我們labmate最近出的狀況...
03/25 11:19, 12F
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03/25 11:18, , 13F
有耶~methanol大概20秒..然後mili-q water兩分鐘..然後在
03/25 11:18, 13F
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03/25 11:21, , 14F
transfer buffer中balence五分鐘(是參照hand book的)
03/25 11:21, 14F
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