[求救] 分段cloning

看板Biotech (生命科學)作者 (Time go by~~~)時間17年前 (2008/08/28 05:59), 編輯推噓2(204)
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已經卡很久的cloning…Orz 小弟正在clone一個3.5kb的轉錄因子… 由於primer專一性不夠高,所以想分段clone… 之後再接起來…因為沒有分段clone再接起來的經驗… 所以請問大家… Q1:整個序列為3.5kb,要把它拆成多大進行clone呢? 如1.7kb和1.8kb兩段或是1kb、1kb、1.5kb… Q2:PCR之後,直接切PCR產物,之後liagation,再 subclone到我的vector上,還是先接上某一個 片段到vector上,再接另一個片段?請問那一種 方法比較好? 感謝大家… -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 91.3.165.60

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這樣做不如把primer專一度提高,細心一點clone全片段好歐
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因為你又切又接,要用哪個酵素切?會不會夾雜vector片段進去?
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不然就要設計成2.5K 2.5K P兩次再把產物混在一起P出全長
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所謂megaprimer是也...
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我也是建議直接整段接進去...3.5K還蠻好接的啦~~
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整段接~之後拿裡面的primer去分段定~
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文章代碼(AID): #18jSvJeL (Biotech)
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