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[求救] 使用pET-29載體進行ligation

看板Biotech (生命科學)作者 (梅子)時間17年前 (2008/08/29 00:18), 編輯推噓3(3推 0噓 5→)
留言8則, 3人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
最近一個約1.5kb的片刻要表現 是用pET-29進行Ligation 切位是 NdeI & XhoI 我是兩種酵素同時去切，再接 轉形後!! 也有長出菌株 可是抽出的質體 我再用酵素cleavage確定有沒接上 可是...就是切不出我要的(size不對...) 問的結果說是可能當初就沒切好 不然就是沒接上 想請問...到底可能是哪裡出問題了?? 是不是一定要分開切?? 麻煩大家幫我一下了!!謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.131.25.40
推
08/29 13:50, , 1F
請問有check過insert上相同的切位嗎?
08/29 13:50, 1F
→
08/29 14:25, , 2F
沒有相同切位太近或是insert有切位的話是可以一起切的
08/29 14:25, 2F
→
08/29 14:25, , 3F
不過要使用他建議的buffer
08/29 14:25, 3F
→
08/29 23:08, , 4F
當初PCR就有設計切位進去!!buffer也用他建議的..
08/29 23:08, 4F
推
08/30 10:25, , 5F
我意思是你insert有沒有被切成兩段?所以才會接出來size不同
08/30 10:25, 5F
推
08/30 22:58, , 6F
分開切～ NEB可以一起切 Takara的或其他可能要分開
08/30 22:58, 6F
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08/31 22:50, , 7F
insert切完有跑膠check就一條band在一樣大小的位置
08/31 22:50, 7F
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08/31 22:51, , 8F
而且當初有確定insert內是沒設計的切位的
08/31 22:51, 8F
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