Re: [求救] 做Western 的protein問題
看板Biotech (生命科學)作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)時間17年前 (2009/03/05 20:56)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串2/2 (看更多)
※ 引述《abbyyam (ㄟ逼)》之銘言：
: 最近做western 簡直是撞鬼了
: 怎麼做怎麼出問題
: 不過這次主要來問一下protein 的問題
: 就是為什麼我的protein + dye 然後弄下去煮以後
: 有些sample會出現一塊一塊 (或是說一坨一坨) 的...雜質還是沉澱物
: 害我load膠的時候卡住
: 而且我也很擔心這樣我蛋白濃度會不會因此改變
: 導致先前算好要load的量不對
: 這到底是為甚麼呢? 出現這種東西有關係嗎? 要怎麼解決呢?
: PS 我在抽protein的時候都有加proteinase inhibitor
我建議你把SAMPLE拿去離心、這很明顯是抽protein的過程沒分乾淨
通常sonication或研磨後的SAMPLE都要再離心、取上清液就好
離心是抽protein的關鍵技巧、速度不對或buffer用錯（包括SDS的量）都會影響
離心後只取融在液體裡的sample
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