Re: [求救] 轉殖菌放大培養
看板Biotech (生命科學)作者chl20020933 (chl20020933)時間16年前 (2009/12/06 01:58)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串3/3 (看更多)
※ 引述《ilovesea (結束了!:D樣)》之銘言：
: 各位版友好
: 先謝謝先前的回答 讓我受益良多
: 想要繼續請教：
: 我目前的狀況是
: 我拿了先前做的菌保
: 先養在含抗生素的plate上
: 他一樣有長
: 因為他有長 所以我認為它質體存在
: 再轉接到10mL含抗生素的broth中
: 搖瓶16小時後 OD600約1.3左右
: 先取出簡單破菌 測酵素活性
: 但結果似乎是沒有活性
: 但他再含抗生素的環境一樣生長
: 請問為什麼會這樣呢?@@
: 謝謝大家
剛好有空 回你一下吧
你的實驗很多東西沒有確定
標準步驟請完成 再來討論酵素活性問題
第一 plasmid在不在 對不對
要破菌前還是抽一下plasmid RE酵素切一下 看pattern就可以知道
第二 蛋白質真的有純化到？
最簡單的 western blot 有結果嗎？
pET series有很多fusion的target 可以做確認
如果蛋白質都沒表現 還需要談活性問題嗎？
先把最基本的東西確定完 再來考慮是不是變inclusion body或蛋白質環境的問題吧
--
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