[求救] 轉殖菌放大培養
最近為了這個實驗做不出
來很頭痛
想不出來原因
只好來板上求各位前輩@@
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我的實驗是要從一隻基因轉殖的菌體中將其培養破碎後
得其胞內酵素 進行轉化產生我要的產物
目前大致上的培養流程如下
single colony
↓ 30C, 24hr
10mL flask
↓ 30C, overnight
100mL flask (10mL 搖瓶後OD600約1.6~1.7, 100*0.1/1.7約加入6 mL)
↓ 27 C, 2hr (使其OD達0.5)
3L Bioreactor
培養16~18 hr後 收槽
後續使用27C是由於先前結果顯示低溫使菌體生長慢質體不易變易
此外 IPTG誘導後會使protein形成inclusion body 因此可能無法誘導@@
最先開始在做生長曲線時
有在發酵槽中加入Ampicillin及Chloramphenicol
酵素活性到16小時後趨於穩定
下一次實驗在發酵槽中未加入抗生素
同樣的有活性
因要再次確認
之後就再也做不出有活性了~
有幾次有找出原因
但最近這兩次已經想不到還有什麼原因了
這株基因轉殖菌的資料如下
- Plasmid：pET-23a (+)
- Cloning Host：DH5α (E. coli strains)
- Expression host：Rosetta-GamiB (DE3) (E. coli strains)抗Kan+Tet+Chl
收槽後是以高壓均質機破碎菌體
懇請各位前輩指教@@
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.104.93
※ 編輯: ilovesea 來自: 140.120.104.93 (11/23 20:55)
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