[求救] 關於分polysome fraction的實驗
小弟我又來問問題了orz
先謝謝之前不吝給予指教的前輩們<(_._)>
目前在做sucrose gradient試圖看目標RNA，在不同的藥物刺激下，做出蛋白質的速率
是否有差異。(已經確定目標RNA的量在不同刺激下並沒有改變，但是蛋白質會有很明顯
的變化)。
我的問題是： 找來的protocol上面寫到，超高速離心完後，要用一台機器做
fractionation。但這台機器還在船上.... 大概還要好一陣子才會送來。
我猜那台機器的原理應該只是測OD看total RNA而已(OD254)，所以想用手動的方式測。
(如果這部分有錯還請各為前輩指正)。
目前sample已經手動分成約15個fraction，但是我不知道要怎樣測OD比較好。
我有想到兩個方法：
一個方法是拿分出來的fraction用實驗室的光度計直接測(未純化)，但是那台要用cuvet
，需要約1000mL的體積。可以每個fraction拿10uL+純水990uL下去測嗎?
還是說必須要先用TRIzol純化出total RNA再測?
另一個方法是去所上借nano-drop測(也未純化RNA)
另外Sucrose會不會影響測OD的結果呢?
麻煩大家了..
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04/14 20:01, , 1F
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