Re: [求救] 關於分polysome fraction的實驗

看板Biotech (生命科學)作者ooooh (學習是一種累積的過程)時間16年前 (2010/04/14 20:35)推噓1(1推 0噓 1→)

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※ 引述《Lambe (落日殘紅始覺春空)》之銘言： : 小弟我又來問問題了orz : 先謝謝之前不吝給予指教的前輩們<(_._)> : 目前在做sucrose gradient試圖看目標RNA，在不同的藥物刺激下，做出蛋白質的速率 : 是否有差異。(已經確定目標RNA的量在不同刺激下並沒有改變，但是蛋白質會有很明顯 : 的變化)。 : 我的問題是：找來的protocol上面寫到，超高速離心完後，要用一台機器做 : fractionation。但這台機器還在船上.... 大概還要好一陣子才會送來。 : 我猜那台機器的原理應該只是測OD看total RNA而已(OD254)，所以想用手動的方式測。 : (如果這部分有錯還請各為前輩指正)。 : 目前sample已經手動分成約15個fraction，但是我不知道要怎樣測OD比較好。 : 我有想到兩個方法： : 一個方法是拿分出來的fraction用實驗室的光度計直接測(未純化)，但是那台要用cuvet : ，需要約1000mL的體積。可以每個fraction拿10uL+純水990uL下去測嗎? : 還是說必須要先用TRIzol純化出total RNA再測? : 另一個方法是去所上借nano-drop測(也未純化RNA) : 另外Sucrose會不會影響測OD的結果呢? : 麻煩大家了.. 我之前的做法是每個fraction 200ul加200ul DEPC水測測完以後可以用trizol去extract RNA 這些RNA可用來detect specific RNA種類by QPCR -- 誰都可以看得出我臉上滿是寂寞無奈你卻用無情的眼神放逐我到無窮的思念國度獨自流浪 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 209.162.8.231