Re: [求救] 蛋白質誘導不出來!!!
: 我直接回好了，
: 這種蛋白表達本來就沒有一定的對或錯的方法
: 我看你的步驟也沒問題
: 我把我的經驗告訴你...
: 你接上 plasmid 之後不知到有沒有先定序，檢查看看有沒有 in frame
: 若是有 in frame
: 另外你是用 pet system，這裡面有隱藏版暗黑
: 那就是經過 transformation 後，若你分盤養個兩代或三代
: 也就是說你把tranformation成功的 colony 挑起來，劃在新的盤子上，然後又挑出來
: 養再另一個盤子上
: 你的 plasmid 的 promotor sequence 會被重組
: 亦或是你把他存成 glycerol stock，挑出來後也會被重組
: 廠商的菌株資料沒寫
: 打電話問半天，他們才吱吱嗚嗚的承認會有這樣的狀況 但是 "very seldom"
: 試試看把 plasmid transfrom into new BL21(DE3) 然後直接挑colony到 broth
根據最後的敘述 我也要提出附議
我曾經養過兩三代 養個兩三代以後就突變了 怎樣都養不出我該會出來的蛋白
經過老闆求證也是會有這個狀況,老闆是說"大概百萬分之一的機率"這麼小
另外
我有一陣子用IPTG誘導失敗率也很高(前一天配的也掛給你看)
後來我就索性全部改用乳糖了
每次都有表達呢~(樂奔)
然後就再也不用IPTG了
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◆ From: 210.59.89.103
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05/19 12:30, , 1F
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05/19 17:43, , 2F
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