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[求救] Western認不到target protein

看板Biotech (生命科學)作者時間14年前 (2011/05/28 20:19), 編輯推噓5(5推 0噓 9→)
留言14則, 8人參與, 最新討論串1/1
目前Western呈色出現了問題 兩張膜是同樣的抗原,不同批收下來的,loading濃度相同 一抗1:1000,室溫作用2hr,wash 10min x3 二抗1:10000,室溫作用1hr,wash 10min x4 抗體兩者都是reuse, 前一張呈色能看到target protein,沒有看到雜band 後一張只看到一條明顯的雜band,沒有target protein 呈色時間後者比前者久,SDS-PAGE都有看到target protein transfer之後染色也確定有轉漬過去 抗體使用只差了一次而已 我的笨腦袋實在想不透到底為什麼會這樣? 請教各位實驗條件能夠做什麼調整 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 122.118.112.128
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05/29 00:38, , 1F
就抗體力價不足啦，差一次就夠他消耗了
05/29 00:38, 1F
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05/29 02:35, , 2F
有些抗體只有一次性
05/29 02:35, 2F
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05/29 11:17, , 3F
所以是ㄧ抗的問題?二抗不用動嗎?
05/29 11:17, 3F
推
05/29 11:38, , 4F
reuse的確會有差 二抗可以的話也不要reuse
05/29 11:38, 4F
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05/29 11:38, , 5F
一抗要reuse的話也許4度C overnight比較有希望
05/29 11:38, 5F
推
05/29 11:49, , 6F
primary我們只有4c overnight才重複用,2nd Ab不重覆
05/29 11:49, 6F
推
05/29 20:49, , 7F
不知道能不能重配一抗重壓一次?
05/29 20:49, 7F
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05/29 21:30, , 8F
我們家一定都得reuse......之前用新配的5000X一抗,可是背
05/29 21:30, 8F
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05/29 21:33, , 9F
景很雜,所以又換回reuse的1000X~如果一抗4度C O/N,二抗還
05/29 21:33, 9F
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05/29 21:35, , 10F
要換新的嗎?另外再問一個,為什麼titer掉了反而是非目標基
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05/29 21:38, , 11F
因比較明顯?我以為會是剩下的抗體都target到目標蛋白上,雜
05/29 21:38, 11F
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05/29 21:39, , 12F
band反而會減少......
05/29 21:39, 12F
推
06/06 01:10, , 13F
二抗不是不可以重複使用,用個兩次左右就換了吧
06/06 01:10, 13F
推
06/06 16:52, , 14F
東省西省浪費的只是你的時間
06/06 16:52, 14F
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