Re: [求救] 大鼠噬骨細胞Osteoclast primary culture

看板Biotech (生命科學)作者Blibra1002 (man)時間14年前 (2011/08/24 20:50)推噓2(2推 0噓 2→)

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※ 引述《hchung (hiflypig)》之銘言： : 之前只有養過會貼附的細胞，這次比較大的挑戰是大鼠噬骨細胞的培養， : 參考之前paper的作法，不過paper上寫的是小鼠的作法， : 想說應該差不多，所以就照著方法作。 : 1.將大鼠腿骨取下，過酒精(15秒)，放進medium : 2.用骨剪將腿骨兩端剪開，插入針頭用medium將細胞沖出。 : 3.用pipette 將細胞盡量沖散 : 4.離心3240rpm, 5min : 5.吸去上清液後用medium懸浮。 : 6.利用ficoll去除紅血球，取中層單核細胞的部分。 : 7.將細胞養在flask，含25ng M-CSF : 8.O/N 取懸浮細胞作培養，加入50ng的RANKL。 : 可是問題來了，我的細胞過了一個禮拜完全沒有形成大顆的噬骨細胞， : 後來將細胞取出來用trypan blue看細胞到底是死的還是活的，發現細胞都是死掉的細胞。 : 之後又試了一次，將上面細胞液先抽出(我覺得上面很飄的應該是死細胞) : 再加入新的medium，在shaker上37C 搖了3個小時。 : 結果還是沒細胞(冏)。 : 想問板上有沒有噬骨細胞培養高手可以解惑呢？ : 另外我想問dentin slice哪裡有賣，還是都是自己作比較多啊~~~ : 以上，拜託大家了!! 你好，我做過這實驗，但是方法不太相同 1.取腿骨，不過酒精直接放到0% DMEM medium中 2.相同2 3.相同3 4.離心1500rpm，不知道你是否roter大小不同所以離3240? 我是大顆落地式的roter 5.吸上清 6.沒做這步，紅血球過幾天就會死掉了 7.放到10cm dish沒加MCSF 8.相同8 另外我們會取一隻老鼠的後兩隻腿骨，以及前上臂骨種成一盤10cm，因為細胞數太少會分化不出來如果沒有去紅血球，我們種到24well中是10^6顆最後我沒有買dentin slice 我買Corning® Osteo Assay Surface 很便宜的，試試看 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.128.67.245