Re: [求救] 用舊的agarose gel跑RNA

看板Biotech (生命科學)作者huuban (冰酒瓶子)時間14年前 (2011/11/12 18:14)推噓0(0推 0噓 0→)

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真的要抓問題的話每個環節都可以挑一挑..當然我不是說到處都是問題只是強調每個環節都很重要還有一點要確定的就是到底有沒有關心到真正的問題在哪裡 ※ 引述《rockerwei (才女)》之銘言： : ※ 引述《rockerwei (才女)》之銘言： : : 再求救一次~我這次已經用新的buffer跑了~可是還是沒有18S和28S的band 也有聽說有的物種本來就只有一條不一定都會有這兩條我們就有樣本總共要有7條 : : 我在想是不是配膠的問題 : : 因為我是直接拿DNA的agarose gel來跑有沒有汙染啊，說不定邊跑邊degrade 膠的濃度是多少呢？會不會跑不動？會不會時間不夠？是不是跳海了？ : : 請問大大們 : : 有沒有配RNA gel 的配方~~ 有，而且有很多種從這裡開始 : 整個流程就是抽完RNA然後我拿5ul去跑膠重點是loading多少量 (RNA的總重 ex : 0.5-1 ug) 不是體積因為我們不知道你的比值有多少 (比值會影響濃度的正確性) 也不知道你用的濃度可能 5 ul太稀，那當然跑不出東西請確定 : 1.你的RNA為無色透明 2.比值及濃度再拿來討論 : 大概是100v 跟電壓無關，50v也可以跑 : 抽RNA的流程就是用組織研磨器加上Tri-zol(3ml)放在50ml的tube裡面打碎什麼組織？多少組織？有沒有超出reagent容許範圍？別人也是這樣抽有成功嗎? 如果有成功案例才拿來討論，否則請看protocol 說不定reagent根本跟樣本不合啊 : 再加入1ml的chloroform~然後votex再分裝到eppendorf裡面~ chloroform的體積依原始protocol應該是600ul吧 (抱歉應該我不清楚調體積會如何 : 等五分鐘~在離心12000rpm 10 min : 離心後取上清液 : 加入isopropanol等30min : 離心12000rpm 30min : 用DEPC-EtOH wash 離心12000rpm 10min : 吸乾酒精~加DEPC-H2O : 然後就測濃度~跑膠~~~ : 我真的不知道發生什麼問題如果是針對跑膠的問題拿別人抽的確定品質 OK 的 RNA 來一起跑，或是跑單股 RNA marker 如果失敗了就是跑膠出問題如果 marker 或是標準品 OK 但你的樣本掛掉，那就是製備上的問題很簡單吧 :) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.43.128.145 ※ 編輯: huuban 來自: 114.43.128.145 (11/12 18:15) ※ 編輯: huuban 來自: 114.43.128.145 (11/12 18:17) ※ 編輯: huuban 來自: 114.43.128.145 (11/12 18:19)