Re: [求救] 用舊的agarose gel跑RNA
※ 引述《rockerwei (才女)》之銘言：
: ※ 引述《pocession (阿宗)》之銘言：
: : 嗯 可能我的意思讓你有點誤解
: : 要跑RNA Marker的原因有兩個
: : 一個是DNA的分子量沒有辦法代表RNA (DNA為雙股，RNA為單股，單體的分子量也不一樣)
: : 另一個是確保你在SAMPLE prepare或是跑膠的過程中RNA沒有分解
: : (如果跑膠的流程中出錯，RNA marker就會分解了，以此作為判斷)
: : 所以你用DNA marker作比較，是沒辦法作任何判斷的
: : 另外，根據我的經驗，膠的新鮮與否並不是很直接的影響
: : 主要是跟你放置的容器和跑膠的buffer有很大的關係
: : 容器要乾淨，跑膠的buffer儘量滅過菌，然後要跑時再稀釋(要用二次水)，
: : 如果要把RNA sample作變性處理
: : 可以自己配製含formaldehyde的loading buffer就好了，滿便宜的
: : 如果不想買RNA marker，可以自己用acid phenol抽新鮮的大腸桿菌(養至對數期的細菌)
: : 裡面會有5S, 16S, 23S；可以幫助你判斷位置和跑膠流程有沒有發生問題
: 再求救一次~我這次已經用新的buffer跑了~可是還是沒有18S和28S的band
: 我在想是不是配膠的問題
: 因為我是直接拿DNA的agarose gel來跑
: 請問大大們
: 有沒有配RNA gel 的配方~~
整個流程就是抽完RNA然後我拿5ul去跑膠
大概是100v
抽RNA的流程就是用組織研磨器加上Tri-zol(3ml)放在50ml的tube裡面打碎
再加入1ml的chloroform~然後votex再分裝到eppendorf裡面~
等五分鐘~在離心12000rpm 10 min
離心後取上清液
加入isopropanol等30min
離心12000rpm 30min
用DEPC-EtOH wash 離心12000rpm 10min
吸乾酒精~加DEPC-H2O
然後就測濃度~跑膠~~~
我真的不知道發生什麼問題
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◆ From: 220.137.0.109
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推
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