[求救]WB壓片有雜點和要看的Ab非常weak

看板Biotech (生命科學)作者 (沉默玩具)時間10年前 (2015/04/17 15:46), 編輯推噓6(6013)
留言19則, 10人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
請教各位版上的朋友 我要看的antibody 是Caspase 3, 9, 7 但我壓片出來後不管是多少濃度的Ab 都看不到band transfer 都確定protein 都有轉印到NC membrane上~~~ 而且還會有一點一點黑色的雜點~ 如下圖 http://ppt.cc/sN61 而我的條件如下: blocking 5% milk 1.5hr 1抗是1:300 o/N TBST wash 10min x3 2抗是 1:10000 1hr TBST wah 10minx3 請各位有甚麼解決之道呢?? 謝謝各位的協助^^ 我的一抗是santa cruz這間廠牌的 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.15.175.165 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1429256760.A.C94.html

04/17 15:47, , 1F
換一家抗體
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santa的優點只有便宜而已
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建議換廠牌..以前用Caspase3(santa)怎麼做都做不出來....
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04/17 16:18, , 4F
聖誕老公公是有名的抗體樂透商
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SC很愛比較有無oe immunogen或FL來確認Ab效果,可是看到隔
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壁的control lane連個band都沒有,不就是宣告說這Ab不好用
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那請教各位有雜點是甚麼原因造成的呢?
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和下面那一張有些區塊都是白色的????
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blocking為何要1.5h 感覺有點太久 另這三支抗體我作起來是
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整張都是雜band 建議換牌吧
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黑點應該是牛奶或wash solution髒掉了
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白色區塊是ECL反應過度,已經耗掉所有2抗活性,就會剩
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白色,其實那是沒有訊號。你看旁邊都是黑色就知道訊號
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很強,猜想你的二抗大概也搖晃的不均勻
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04/18 20:09, , 15F
換抗體
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04/19 16:48, , 16F
抗體吧 但我覺得blocking時間應該還好
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有時後來不及我都會丟4度 o/n
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04/25 21:35, , 18F
滿天星是不是因為抗體沉澱的關係?我以前也曾經遇過
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04/25 21:36, , 19F
但不知道該怎麼解決 求高手幫解><
04/25 21:36, 19F
文章代碼(AID): #1LCBeuoK (Biotech)
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