Re: [求救]WB壓片有雜點和要看的Ab非常weak

看板Biotech (生命科學)作者 (沉默玩具)時間10年前 (2015/04/19 19:46), 編輯推噓0(008)
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謝謝各位熱心的推文 但各位的方法 我有試過例如 1抗 O/N 或是blocking O/N 都沒有用還是一樣有雜點和白色或全黑 我有曾經將一抗和二抗拿去離心個幾秒鐘~ 但結果沒甚麼變化~ 因為目前實驗室沒有多餘的錢可以購入新的Ab 請教各位還有甚麼辦法可以解決的~~~~ 感謝各位^^ ※ 引述《t123401221 (沉默玩具)》之銘言: : 請教各位版上的朋友 : 我要看的antibody 是Caspase 3, 9, 7 : 但我壓片出來後不管是多少濃度的Ab 都看不到band : transfer 都確定protein 都有轉印到NC membrane上~~~ : 而且還會有一點一點黑色的雜點~ : 如下圖 : http://ppt.cc/sN61 : 而我的條件如下: : blocking 5% milk 1.5hr : 1抗是1:300 o/N : TBST wash 10min x3 : 2抗是 1:10000 1hr : TBST wah 10minx3 : 請各位有甚麼解決之道呢?? : 謝謝各位的協助^^ : 我的一抗是santa cruz這間廠牌的 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.206.26.45 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1429443981.A.D03.html

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抗體壓不出來就是壓不出來,被你硬弄出東西來你反而要擔心
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那東西是真的還假的
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這種狀況只能換抗體不要再想別的了
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沒做過NC 用PVDF的經驗是如果用BSA背景會比較少有雜點 但
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04/19 21:51, , 5F
也建議換抗體 別浪費時間
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04/26 16:55, , 6F
還是你有positive control的sample,去試試看
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04/26 16:57, , 7F
能出來是最好,不能出來表示抗體真的有問題,趕快去換
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04/26 16:58, , 8F
要不然你消耗耗材跟時間的成本還比去買新抗體還貴
04/26 16:58, 8F
文章代碼(AID): #1LCvMDq3 (Biotech)
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