Re: Immunofluorescent 一直染不出來

看板Biotech (生命科學)作者 (嘿嘿)時間10年前 (2015/04/26 19:15), 編輯推噓1(102)
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一抗用序列?系列?稀釋 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 二抗則為 1:200 ※ 引述《s64123 (嘿嘿)》之銘言: : 想詢問各位大大 : 冷凍切片後 : 我染特定細胞的 receptor (tyrosine kinase receptor) : 但染完都沒有我要看得細胞 : 應該說 POSITIVE 跟 NEGATIVE 是同樣亮度的 : 步驟如下 : 0.01 M PBS wash 5min*3 : 2% NGS-0.1% BSA- 0.2% Triton blocking 5 mins : 10 % NGS-0.1% BSA- 0.2% Triton blocking 20 mins : 0.01 M PBS wash 5min*3 : add primary antibody overnight at 4 度C : 0.01 M PBS wash 5min*3 : add secondary antibody 30 mins : 0.01 M PBS wash 5min*3 : coverslip : 一抗是新買的 : 想請各位知道哪裡出問題嗎? : 感謝 > < : 發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 : 以方便板友幫您追蹤問題 : 若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等)之分讓, : 請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA),否則版工將逕行刪除 : ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.27.47.78 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1430046906.A.603.html

05/04 11:11, , 1F
我做過cytospin切片,發現沒使用acetone或methanol固
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05/04 11:12, , 2F
定的話幾乎IHC都染不出來,不知道冷凍切片一開始是否
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05/04 11:12, , 3F
也要用methanol固定 (略查了網路好像也要)
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