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[求救] MTT assay

看板Biotech (生命科學)作者 (Altrose)時間9年前 (2016/04/08 11:13), 編輯推噓7(7推 0噓 23→)
留言30則, 14人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
小妹最近在做化療藥物對癌細胞影響的生長曲線 使用MTT assay 步驟如下： 1.先將細胞使用trypsin切下後去離心再懸浮1cc medium，之後去計數細胞 2.種在96well，每1well 1500顆細胞 3.會把算好的細胞數加到15cc 離心管的medium裡面去votex(因為之前都打散但不均勻所 以想到此方法) 4.等24小時後再去加8個不同濃度的藥物 5.等72小時加入MTT試劑，再等3小時加入DMSO之後去測吸光值。 所遇到的問題如下： 種細胞的時候都會看有沒有種均勻 每次都看有種均勻了 但加藥72小時後細胞都沒有受到藥物毒殺的影響!!!!(長得超好超滿 ) 可是之前學長做曲線都有出來... 藥物濃度跟細胞數都跟學長先前的實驗一樣沒有改 所以很困惑到底是哪裡做錯了QAQ 還請大大們解惑，謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 210.60.122.151 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1460085210.A.DB5.html
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04/08 11:39, , 1F
藥壞了
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04/08 11:50, , 2F
回r大，藥應該沒有壞!! 因為另一個細胞株曲線有出來
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04/08 11:50, , 3F
，抱歉忘記講了
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04/08 12:04, , 4F
所以你跟學長用不同細胞？
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04/08 12:10, , 5F
細胞跟藥都是一樣的QQ
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04/08 12:47, , 6F
藥的有效期限?有沒有反覆凍溶?
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推
04/08 13:18, , 7F
請學長repeat一次確認有效
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推
04/08 13:38, , 8F
請跟你學長好好討論實驗細節
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04/08 16:23, , 9F
藥濃度稀釋錯了?
04/08 16:23, 9F
推
04/09 07:44, , 10F
藥怎麼加的？建議跟medium先配好再加
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04/09 07:44, , 11F
有些人會直接把藥加進去，很容易誤差
04/09 07:44, 11F
推
04/09 14:32, , 12F
細胞太少看不出誤差？
04/09 14:32, 12F
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04/13 08:15, , 13F
回g大，藥是跟medium混合的
04/13 08:15, 13F
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04/13 08:16, , 14F
回h大，已經有重算，藥稀釋倍率沒有問題....
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04/13 08:17, , 15F
感謝大家的回覆QQ已經有好好跟學長討論了 最近會重
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04/13 08:17, , 16F
做
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推
04/14 23:29, , 17F
我的細胞數是3000/1well,然後MTT作用4hr，給你參考
04/14 23:29, 17F
推
04/14 23:52, , 18F
能附上吸光值數值嗎?
04/14 23:52, 18F
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04/17 02:03, , 19F
實驗條件都一樣 那麼操作方法有一樣?
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就像你將cell打散的方法
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04/27 16:20, , 21F
1.查藥有沒有 light sensitive
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如果有...可能藥壞掉了...
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2.我是用 1ml pipetman打散較"團結"的細胞塊 vertex
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太強怕 傷細胞
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3.呃..我種6000or 8000/cell ,48H. XD
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4.然後請學長用你用過的細胞 同批藥 "同樣"步驟重複
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實驗 如果...還是不一樣 ..呃...就無解惹..
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不過我移除 treated drug的medium後 MTT只處理20~40
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min 就是了吸光0.6~0.8偶爾破個1這樣 XD
04/27 16:49, 29F
推
05/31 10:18, , 30F
會不會是細胞計數算錯,加太多細胞了??
05/31 10:18, 30F
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