[求救] 細胞實驗,關於時間點的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (愛幻想)時間9年前 (2016/04/27 12:55), 9年前編輯推噓2(2022)
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實驗目的:想觀察SW480經過不同時間的serum stavation(12hr,24hr) 會不會因為時間的長短不同,產生apoptosis現象 參考此文章:因為Western blot ,未經藥物誘導的細胞也有看到cleavage caspase8 而此藥物主要觀察的現象是誘導necrosis,所以想確認是否為實驗過程所誘導的 https://www.researchgate.net/post/How_can_I_do_serum_starvation_for_suspended_ cells 實驗流程:1.細胞分盤等待貼盤時間固定12hr 2.serum stavation 固定12hr & 24hr兩個時間點 3.模擬treated drug 時間 16hr 4.flow cytometry 核心問題:如果我使用不同批cell line,想要觀察時間點的差異,能可以解釋此現象 會因為時間不同而型態有所不同嗎? 例如:甲:A盤直接分B兩個條件的細胞(12hr,24hr)出來, (困擾的地方,會做很晚) 乙:使用不同盤的細胞,A盤分B(12hr),C盤分D(24hr),但實驗條件相同 另外還有個小小的問題: 如果不同種Cell line間想要比較的話,當中serum stavation 時間不同的話 要怎使實驗一致。 **不同的意思是,因為有使用初代細胞,有文獻指出這種細胞serum stavation 過長會漂浮,所以想問看看要怎麼解決,還是在文章裡面標示清楚就好? 文章有點長 感謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.114.74.159 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1461732955.A.5D3.html

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一般seeding都是等24h再進行後續實驗;模擬drug 16hr是為了
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產生apoptosis? 一般為了方便都6,8,或24h,是特殊drug嗎?
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我的習慣會先試甲,但修改成作息方便的操作條件
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※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:58:54 ※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:59:29 ※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:59:57

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Seeding後24h是為了讓細胞型態回到正常的狀態嗎?
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這樣的話細胞數量要怎麼估計
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之前有用過這株細胞做過WST-1 assay OD值與細胞數的關係
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條件是用這樣,因為實驗室這株細胞已使用約幾年時間
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所以有點不確定doubling time會與來源很相近
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※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 15:46:23

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像我習慣是下午種細胞,隔日上午進行後續處理(如
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starvation,加藥等)
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我記得先前starvation時間過長,會發生細胞死亡(顯微鏡)
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但沒有特別去壓caspase 3(要跑12%的膠,有點麻煩)
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不太懂做這實驗的目的, 平常用藥物處理的時候不也會有組
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對照組嗎, 應該就是serum starvation時間和實驗組相同的
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DMSO or 其他vehicle control
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因為control 組也有看到caspase 表現量
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※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 18:35:20 ※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 18:38:00

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我也不太懂,不能甲分盤後取normal,12h,24h starved這三盤
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直接看caspase 8 WB?
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WB 比較費工XD 那我直接還是照原本計畫走好了T^T
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因為有4個cell line要做 WB會做到暈
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我們是要求這類實驗,細胞要至少過了一次 doubling time 才
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開始。若是初代細胞問題,那就限制所有實驗細胞都是初代的。
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使用初代的目的是想確認normal cell與cancer cell
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藥物作用後的差異
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文章代碼(AID): #1N84PRNJ (Biotech)
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