[求救] 請教製作stable clone cell line花的時間

看板Biotech (生命科學)作者niwe (雲煙)時間9年前 (2016/05/29 22:21)推噓2(2推 0噓 16→)

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各位好，小弟想請問製作stable cell line的時間，先前有做transient transfection，(要transfect的質體為pCMV載體) 使用polyjet這種kit(另外也比較過lipofectamine 2000及3000)，效果都不是很好，因此想把這載體上的目標蛋白先切，再接到病毒的載體，再進行site-direct mutagenesis，然後把這兩種質體藉由病毒感染的方式使細胞能持續表達，請問這樣的時間大約會花多久？ (我先前沒有做過，但實驗室有位助理有經驗，他初步估計要2-3個月以上的時間) 備註：上次聽到一位同學，他把這實驗外包給國外的實驗室，花了十七萬元(但不保證成功) 不曉得這樣換算成實驗的時間有沒有比較划算？ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 210.60.122.151 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1464531665.A.D38.html

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sunorange

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e8795623

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blence

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pCMV上的載體已經有我要的target protein，要transfect到口腔癌細胞上，先前發現使用的口腔癌細胞使用polyjet transfect EGFP約3成， → Ice9: 為什麼不先做突變再轉到病毒載體上？謝謝喔，但我不曉得先mutation再轉到病毒載體，和轉到病毒載體再做突變的差異？ 05/30 01:30

推

joseph103331

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joseph103331

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GFP marker的意思是甚麼呢？我先前曾經把我要的protein接上EGFP-N1， tranfection之後，再使用G418來篩選，結果養了二代細胞就不亮了，不曉得是否帶有EGFP的fusion protein就比較難養？ ※ 編輯: niwe (210.60.122.151), 05/30/2016 22:23:34

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blence

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blence

05/30 22:58, , 8^F

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niwe

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