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[求救] 觀察蛋白質入核的實驗

看板Biotech (生命科學)作者 (FTY429)時間9年前 (2016/06/01 13:52), 9年前編輯推噓0(0推 0噓 11→)
留言11則, 5人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
嗨大家好： 敝人正從事關於蛋白質從細胞膜轉位到細胞核(nuclear translocation)的研究。 要觀察這個蛋白質入核的現象，我目前採用兩種實驗方法： 1. 核質蛋白分離後，做Western blot 2. 螢光染色 (immunofluorescence) 想請問有沒有其他建議的實驗方法，也適用"觀察蛋白質入核"這個現象？ 感激不盡！ 祝大家實驗順利。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.190 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1464760358.A.2D5.html
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06/01 15:17, , 1F
3目標蛋白接GFP做live image?
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06/01 15:17, , 2F
多打了3...
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同一樓，這方式最直接
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06/01 22:15, , 4F
不過有的蛋白質接上螢光後行為會改變
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嗯嗯，做個fusion protein也沒問題，只是之前跟教授提過，她覺得GFP這麼大顆，入核的? ※ 編輯: FYT0429 (1.171.57.236), 06/01/2016 23:46:12
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06/02 06:46, , 5F
你查一小有關EGFR還是FGFR的文章，應該有參考價值。
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另外有種作法，如果將已知的入核序列破壞，應該可以阻入核。
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06/02 06:49, , 7F
再則，如果條件合適，可以試試in vitro import assay。
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06/02 06:51, , 8F
GFP 不太建議。若要做，可以考慮中間弄個「合適的」linker。
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感謝回覆。 我已經做了NLS mutated construct，GFP和invitro import assay我再看仔細一點：) ※ 編輯: FYT0429 (223.137.122.32), 06/02/2016 16:20:52
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06/02 17:28, , 9F
對了，還要注意細胞是否會自然生成membrane或nuclear兩種產
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06/02 17:32, , 10F
物。觀察手段方面，大概就你說的WB和IF兩種了。
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06/04 02:29, , 11F
gfp進核是肯定沒問題啊
06/04 02:29, 11F
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