Re: [求救] SF9細胞株培養問題

看板Biotech (生命科學)作者s992003 (Lord of Ethanol)時間9年前 (2016/06/13 13:40)推噓0(0推 0噓 4→)

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抱歉小弟又來了最近培養細胞又有新的問題細胞前面幾代長的好好的但是後來細胞飄的情況變有點嚴重感覺好像死光了方法是用貼盤培養細胞剛分下去還會貼盤隔天也會長，只是速度稍慢而且會飄一些再過幾天就越飄越多，最後就全飄了培養基grace 90% FBS 10% 抗生素 1% 溫度 27蚓一樣的培養基一樣的細胞一樣的手法不知道為什麼會這樣有可能是要拍細下來的時候拍太大力嗎？因為不好力道不好控制，有可能每次不太一樣 ※ 引述《s992003 (Lord of Ethanol)》之銘言： : 爬文好像沒看到有人有這個問題 : 小弟最近剛培養的SF9型態上不太正常，有橢圓還有長條狀，甚至還有些特別大(確定不是 : 污染) : 但是還是硬把它繼代下去，想說看會不會越來越健康，但是結果時好時壞 : 我在解凍之後分了四代，繼代兩次之後長的比較好(大小形狀較一致，圓形) : 想說應該穩定了，結果再分下去型態又開始怪怪的 : 起初有想過培養基有問題(一個月前配製)，但換了培養基之後還是一樣 : 想說可能那批凍的細胞比較不好，所以有解凍另外一批看看，也是一樣的情形 : 小弟的培養基是 : grace 90% : FBS 10% (57度煮30分鐘) : PS 1% : 解凍方式 : 取出液態氮的細胞，在27度水浴下迅速解凍至細胞尚有少許冰晶 : 吸出細胞至離心管，加入10ml預熱的培養基 : 離心，去除液體，再加入10ml預熱的培養基，將細胞沖散 : 再次離心，以去除抗凍劑，接著去除液體，加入10ml培養基沖散並且注入T75 flask中 : 放入27度培養箱中 : 一小時之後換新的培養基，接著20小時後再換一次，24小時再換一次，細胞就長的差不多 : 了 : 繼代方式是用手拍下來再分盤 : 小弟目前是懷疑溫度的影響，第一個是培養箱開門之後由於細胞培養房的溫度較低，培養 : 箱會降溫一點，接著為了維持設定的溫度會再升回去，只是升溫後不會剛好停在27度，會 : 升到28度左右再慢慢降回去，所以整個恆溫系統在開培養箱之後會暫時不太穩定 : 另外是細胞培養房的溫度都是在22度左右，不知道在外面操作時間稍微長一點是否會導致 : 培養基變冷，還有拿出來的細胞感受到的溫度也太低，只是實驗室培養的其他細胞株都養 : 的好好的，所以也不確定這個因素有影響 : 由於現在實驗室SF9只剩小弟在養了，也不知道如何是好 : 上網找不太到答案，有阿豆仔說如果細胞庫存夠多，不要花時間把細胞養好，解凍健康的 : 細胞比較好，但小弟已經試過三批細胞了，感覺情形都差不多 : 細胞不健康就不能繼續做下去…囧 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.83.84.82 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1465796421.A.00E.html