Re: 質體
看板Biotech (生命科學)作者jasontang (Yankee Hotel Foxtrot)時間4年前 (2020/08/25 06:14)推噓0(0推 0噓 14→)留言14則, 2人參與討論串2/2 (看更多)
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我本身在美國的合成生物學中心唸博班 也有去英國的實驗室交換過
基本上這些實驗室每天就是不停地做cloning
以原po的問題來說通常會用Gibson Assembly
但是只要有用到PCR的部分 不管用的酵素多好都一定還是會定序
也因為如此Gibson Assembly往往只用在小規模的cloning
日常來說最主流的就是Golden Gate cloning (Type IIs RE + DNA ligase)
還有Gloden Gate衍生出的MoClo (modular cloning)
通常把insert做成part plasmid的時候會做定序
之後的組裝過程就不用再定序了 因為沒有用到PCR
這樣對要拼大一點的質體來說比較有效率 通常20kb以內都沒甚麼問題
頂多送Addgene保存之前會定序一次
有些實驗室會用Gateway cloning 原因也差不多
另外推薦一下Addgene的Plasmids 101 (有PDF版本)
https://blog.addgene.org/plasmids-101-what-is-a-plasmid
可以對常用的cloning方法有初步的認識
通常新加入實驗室的成員我們都會請他們先瀏覽一遍
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 18.20.15.46 (美國)
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1598307249.A.D0D.html
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