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討論串[求救] cloning
共 15 篇文章
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#15
Re: [求救] cloning
推噓2(2推 0噓 2→)留言4則，0人參與, 最新作者boblu (六百)時間15年前 (2010/08/17 23:28), 編輯資訊
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1. 那個 "雜band" 有沒有可能就是你的 plasmid 本身？. 2. 是否你的 primer pair 也會黏到空 vector PCR？. 甚至不需要兩個 parimer 都會黏 vector.. 只有其中一個 primer 可以黏上 vector, 也就足夠產生另一個 PCR prod
#14
[求救] cloning
推噓8(8推 0噓 5→)留言13則，0人參與, 最新作者iwenyo2 (柚子)時間15年前 (2010/08/17 20:07), 編輯資訊
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最近利用commerial的TA cloning. 將需要保存的gene 以profreading Taq PCR 後. 切膠純化後 做A- tailing. 以kit ligation transform 至DH5a. 隔天長出colony 以colony PCR 後得到我想要的產物(~400bp
(還有98個字)
#13
Re: [求救] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者cayumi (far away)時間18年前 (2007/02/27 18:43), 編輯資訊
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那如果是這樣的話. 你可以用含你的insert的plasmid(應該有定序過,確認序列無誤吧!?)當作 DNA template. 用"好一點"的taq(ex:takara 的ex-taq)做pcr. primer就用你有設計切位的primer,總體積的話30-60μl皆可. pcr跑完之後,pcr
(還有305個字)
#12
Re: [求救] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Adler (Adler)時間18年前 (2007/02/27 18:06), 編輯資訊
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我是用我自己在primer設計的切位. ㄜ...我之前說的連續的band,是指它是一整片,由一百分佈至其下皆有. 可能造成你的誤會了... 抱歉..@@. 切RE的gel我沒有照像耶...抱歉. 我會用你的方法再試試的~^^ 謝謝你~. ps.抱歉這麼晚才回...@@. --. ※ 發信站: 批踢踢
#11
Re: [求救] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者cayumi (far away)時間18年前 (2007/02/25 14:15), 編輯資訊
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Promega的enzyme我沒用過 我只用過TAKARA 和Bio-lab(NEB)的enzyme. Promega的的T4 ligase 他本身附的是10X buffer. 他們公司另外有出一種 2X rapid ligation buffer,我是都用這個 ligation buffer. 我
(還有562個字)
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