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討論串[求救] cloning
共 15 篇文章
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#5
[求救] cloning
推噓2(2推 0噓 2→)留言4則，0人參與, 最新作者willie0208 (我不要現在就出征....)時間19年前 (2007/02/10 21:47), 編輯資訊
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我有一段約4kb的vector要跟一段約2.4kb的insert接起來. 兩個plasmid兩端的切位分別用NotI和NcoI照理說應該很好接. 但是我做了兩三個月了~還沒做出來~. 問題到底出在那~塗盤後我的control組沒長(有加ligase怕自接). test組長個兩三顆~挑出來抽DNA後在
#4
Re: [求救] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)時間19年前 (2006/12/05 01:54), 編輯資訊
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不懂？zero blunt TOPO是幫助你五分鐘內接成blunt end PCR product..... 你設計primer有RE何意？因為vector上有SalI/PstI sites嗎？. 怎不用pfu作PCR直接用zero blunt TOPO vector接？. pCR-BluntII
#3
Re: [求救] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)時間19年前 (2006/12/05 01:48), 編輯資訊
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這招有用嗎？self-ligation也是會往上跳不是？. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 210.58.54.177.
#2
Re: [求救] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者zytase (新的動力~~)時間19年前 (2006/12/04 14:18), 編輯資訊
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應該跟長不長得出來沒關係,我們實驗室如果RE切下來的片段很小就直接. 用DNA clean up耶~會不會是ligation的效率太差?. 我們在RE之後會再加phosphotase在vector裡~. 成功率會提高!對於怎麼做就是成功不了這件事我也深有同感.... 之前也發生過這樣的事 後來只好換
#1
[求救] cloning
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者sswweett (lalala)時間19年前 (2006/12/04 10:10), 編輯資訊
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想請教各位大大關於cloning的問題. 我的insert是primer有設計RE的PCR product(1.2K). (用的是zero Blunt TOPO PCR cloning kit). vector 是5K. 用2種RE分別切(SalI/PstI)insert 和 vector(O/N)
(還有319個字)
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