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討論串[求救] cloning

共 15 篇文章

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推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者Adler (Adler)時間18年前 (2007/02/25 12:22)資訊

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enzyme與ligase是用Promega的. elution kit是用Viogen的. plasmid也是用Viogen的midi kit抽. run plasmid 的gel為1% ; run insert的gel為2%. plasmid為single digestion. ligation

Re: [求救] cloning

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者cayumi (far away)時間18年前 (2007/02/25 01:28)資訊

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所使用的enzyme是哪家公司的!? 又是哪一種enzyme!?. digestion的方式是single digestion還是double digestion!?. plasmid是用kit抽的還是用傳統的抽法!?gel是用幾%的!? elution kit是用哪家的!?(有的廠牌回收率不好).

(還有113個字)

Re: [求救] cloning

推噓0(0推 )留言1則，0人參與作者Adler (Adler)時間19年前 (2007/02/12 20:58)資訊

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不好意思,之前寫得淺了. 我的insert只有51b.p. 要接在5kb的vector. vector為pET23a 已接有另一段約1.4kb的基因. insert已經接到另一TA vector上為pTZ57R/T. 目前是用RE切出insert 由於plasmid的濃度高. 所以在gel ext

Re: [求救] cloning

推噓1(1推 )留言1則，0人參與作者werthers6925 (...)時間19年前 (2007/02/12 13:10)資訊

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首先, 問的問題還是像前面一位一樣...請問...你的insert是怎麼來的??. 第一, 如果是從其他plasmid上切下來....那你應該可以check酵素的作用能力如何. 這應該比較沒問題................ 第二, 如果你的insert是利用PCR的方式做出來..... 那你的p

(還有253個字)

Re: [求救] cloning

推噓3(3推 )留言5則，0人參與作者philesazumi (苦悶阿)時間19年前 (2007/02/11 15:12)資訊

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1. 你如何判斷insert確實有切？. 2. insert如何來的？. 3. 有幾個control，兩個嗎？（有切，沒加ligase;有切，有加ligase）. 4. 最後用相同的酵素切，如果你是要接入 MCS site. 當然跟原本的vector差不多一樣大阿. 你要看有沒兩條band吧（4kb

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