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[求救] cloning

看板Biotech (生命科學)作者 (柚子)時間15年前 (2010/08/17 20:07), 編輯推噓8(8推 0噓 5→)
留言13則, 11人參與, 最新討論串14/15 (看更多)
最近利用commerial的TA cloning 將需要保存的gene 以profreading Taq PCR 後 切膠純化後 做A- tailing 以kit ligation transform 至DH5a 隔天長出colony 以colony PCR 後得到我想要的產物(~400bp) 但clony養liquid 抽plasmid run PCR 後卻發現 除了目標產物外 有一個很大的band (>3K) 想請問 那個band 雜band嗎? 為什麼colony PCR 跟plasmid DNA PCR 結果會有差異?? 麻煩了 感謝!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.160
推
08/17 21:09, , 1F
很大的band是多大？RNA沒弄乾淨阿？
08/17 21:09, 1F
推
08/17 22:08, , 2F
抽 plasmid 抽出雜 band 跟cloning 有無成功沒有直接關係吧
08/17 22:08, 2F
→
08/17 22:08, , 3F
另外你忘了說你 plasmid DNA PCR 出來的結果為何？
08/17 22:08, 3F
→
08/17 23:04, , 4F
plasmid DNA PCR 結果除了目標產物外還有一個很大的band
08/17 23:04, 4F
※ 編輯: iwenyo2 來自: 163.25.118.160 (08/17 23:06)
→
08/17 23:25, , 5F
是你的plasmid;兩次PCR的template差異很大,當然不需比較
08/17 23:25, 5F
推
08/18 06:50, , 6F
怎麼會有proofreading的taq???是混和酵素嗎???
08/18 06:50, 6F
推
08/18 08:42, , 7F
可能是template太濃 稀釋更高倍試試吧
08/18 08:42, 7F
推
08/18 23:53, , 8F
同上~
08/18 23:53, 8F
推
08/19 21:14, , 9F
同上 plasmid PCR只需1 ng以下的template..
08/19 21:14, 9F
→
08/19 21:15, , 10F
高於100ng就很有機會在膠上看到plasmid本身 定個量吧~
08/19 21:15, 10F
推
08/20 09:49, , 11F
用RE check看看 PCR條件不對常常有怪事發生
08/20 09:49, 11F
推
08/22 02:22, , 12F
變成 iPCR??
08/22 02:22, 12F
→
08/22 07:31, , 13F
是你去做PCR的template~plasmid DNA做PCR 20ng足足夠了
08/22 07:31, 13F
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4
Re: [求救] cloning
boblu
15年前, 08/17
8
13
[求救] cloning
iwenyo2
15年前, 08/17
0
1
Re: [求救] cloning
Adler
19年前, 02/12
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