[問題] 請教一個關於intron loss的問題

看板Biology (生物學)作者 (小熊維尼的天才老爹)時間15年前 (2011/02/15 11:22), 編輯推噓2(203)
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【問題】:已定序的intron loss event,可否僅是PCR時amplified到被轉譯的基因      片段,而非真正的lost intron 【問題起因】:小弟於研究中發現到幾個intron loss events並且得到該intron完全        切除的定序結果,為之興奮不已。但是有教授質疑此結果可能是我做        PCR時複製到剛好已完成轉譯的片段。 【個人看法】:由於整個DNA extraction過程中都有小心做RNase處理,理論上應該        不會發生轉譯完成的mRNA存在又被RT成cDNA後在PCR時增幅。另外;        跑膠的結果也都只有單一條cDNA size的band而已,如果是教授所說        的情況發生,應該會看到原本的基因片段和無intron的片段兩條bands        同時存在。我用以上這兩點解釋時是蠻有信心的,可是教授一直在奸        笑,笑的我心發寒… -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.16.202 WinnieDad:轉錄至看板 Biotech 02/15 11:22

02/16 12:18, , 1F
那你就真的純化RNA+RT再PCR來證明如此產物的size不一樣
02/16 12:18, 1F

02/16 15:43, , 2F
問題是理論上來說應該一樣,由於這段intron是完整遺失,
02/16 15:43, 2F

02/16 15:44, , 3F
所以如果我直接PCR cDNA,會得到一樣的size。
02/16 15:44, 3F

02/17 12:59, , 4F
那你就比較1F實驗與你原先的實驗, PCR出來的"量"差異.
02/17 12:59, 4F

03/04 21:03, , 5F
DNA---->RNA 不是應該叫轉錄(Transcription)嗎
03/04 21:03, 5F
文章代碼(AID): #1DMV5WU4 (Biology)
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