Re: [問題] SDS-PAGE stacking gel一直不凝
※ 引述《chiasaiqueen.bbs@ptt.cc (其實是水桶腰)》之銘言：
: 昨天我做片SDS-PAGE, seperating gel很快就凝了(約30 min)，
: 然後做stacking gel的時候，卻死都不凝，做了4次，4次都一樣，
: 甚至連well底都不凝，但是剩下來放在tube的卻全都凝了；
: 我懷疑是沒有mix好，但是我做的步驟如下：
: 加水、acrylamide/bis-acrylamids、tris buffer、SDS
: -> vortex, spin down
: ->加APS
: -> vortex, spin down
: ->加TEMED
: -> vortex, spin down
: 我想應該不是reagent的問題，因為我seperating gel用的都是同樣的reagent，
: (除了tris buffer>
: 而且tube裡的都凝了…
: 請問版上的大大們有類似經驗嗎?可能是什麼問題?
: APS應該不會在一瞬間壞掉吧…
: 以前從來沒有過這種經驗…
遇到這種狀況真的是滿無奈的…
sample都弄好了…就是膠搞不凝…真是見鬼了！！
這種時候我就是自認倒楣再做一片，然後加double的aps，
不過我的狀況是連剩下留在tube裡的膠也不凝耶…後來也確定是aps的問題
10分鐘就凝了！通常膠不凝就是aps出問題，aps很難搞
有時候放在室溫沒冰起來還是很好用
有時候從冰箱拿出來的反而不會凝…(不好意思吐一下苦水…我也被aps搞瘋過)
會不會是你在凝膠的過程中有搖晃…如果有動到的話…也是會使膠搞不凝的
還有一個建議是在加入stacking gel前…我會用ddh2o把95% elcohol洗掉
這樣stacking 的效果比較好
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