Re: [問題]不同的細胞固定方法
看板Biotech (生命科學)作者fjubiology (Proposal結束)時間19年前 (2006/04/14 23:51)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串2/3 (看更多)
※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言：
: 想問 PFA 跟 有機溶劑固定之間的差異
: 我的認知是有機溶劑比較適合 cytoskeleton 的固定
: 有些細胞質內的蛋白質則可能會擴散或流失掉
: PFA 的固定則似乎沒有那麼"牢" 經驗上總絕得細胞比較容易浮起來
: 想請問 如果是單純要看 GFP / EGFP, 是否可以用有機溶劑來固定呢？
: 又，如果是帶 GFP 的 fusion protein,
: 是否有什麼法則預先判斷是否適合使用有機溶劑固定？
以我以前作粒線體蛋白螢光染色，建議用3.7 %的PFA pH 7.，通常我都是用medium固定。
PFA加熱後會偏鹼，所以通常我都把STOCK的PFA調成 pH 3~4左右，跟MEDIUM混完後
pH大概是7左右，剛剛好不會使細胞/粒線體變形。固定時間約為15～30分，室溫。
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※ 編輯: fjubiology 來自: 140.136.198.230 (04/14 23:59)
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