Re: [問題]不同的細胞固定方法
※ 引述《fjubiology (Proposal結束)》之銘言:
: ※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言:
: : 想問 PFA 跟 有機溶劑固定之間的差異
: : 我的認知是有機溶劑比較適合 cytoskeleton 的固定
: : 有些細胞質內的蛋白質則可能會擴散或流失掉
: : PFA 的固定則似乎沒有那麼"牢" 經驗上總絕得細胞比較容易浮起來
: : 想請問 如果是單純要看 GFP / EGFP, 是否可以用有機溶劑來固定呢?
: : 又,如果是帶 GFP 的 fusion protein,
: : 是否有什麼法則預先判斷是否適合使用有機溶劑固定?
: 以我以前作粒線體蛋白螢光染色,建議用3.7 %的PFA pH 7.,通常我都是用medium固定。
: PFA加熱後會偏鹼,所以通常我都把STOCK的PFA調成 pH 3~4左右,跟MEDIUM混完後
: pH大概是7左右,剛剛好不會使細胞/粒線體變形。固定時間約為15~30分,室溫。
我是配在PBS裡面
PFA 3% 加到PBS裡面之後放到55度水浴槽中
等到PFA溶解後再調pH值
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大家都說沒有相本的是遜咖
好險我剛好有
http://photo.youthwant.com.tw/GHJKL1478
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.131.67
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04/15 23:02, , 2F
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