Re: [問題]不同的細胞固定方法

看板Biotech (生命科學)作者 (黃寶臻黃寶臻黃寶臻)時間19年前 (2006/04/15 01:24), 編輯推噓2(200)
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※ 引述《fjubiology (Proposal結束)》之銘言: : ※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言: : : 想問 PFA 跟 有機溶劑固定之間的差異 : : 我的認知是有機溶劑比較適合 cytoskeleton 的固定 : : 有些細胞質內的蛋白質則可能會擴散或流失掉 : : PFA 的固定則似乎沒有那麼"牢" 經驗上總絕得細胞比較容易浮起來 : : 想請問 如果是單純要看 GFP / EGFP, 是否可以用有機溶劑來固定呢? : : 又,如果是帶 GFP 的 fusion protein, : : 是否有什麼法則預先判斷是否適合使用有機溶劑固定? : 以我以前作粒線體蛋白螢光染色,建議用3.7 %的PFA pH 7.,通常我都是用medium固定。 : PFA加熱後會偏鹼,所以通常我都把STOCK的PFA調成 pH 3~4左右,跟MEDIUM混完後 : pH大概是7左右,剛剛好不會使細胞/粒線體變形。固定時間約為15~30分,室溫。 我是配在PBS裡面 PFA 3% 加到PBS裡面之後放到55度水浴槽中 等到PFA溶解後再調pH值 -- 大家都說沒有相本的是遜咖 好險我剛好有 http://photo.youthwant.com.tw/GHJKL1478 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.131.67

04/15 21:53, , 1F
請問PFA在PBS中 水浴55度需要花很久時間嗎?
04/15 21:53, 1F

04/15 23:02, , 2F
不會,大約是2到5分鐘
04/15 23:02, 2F
文章代碼(AID): #14FzhGM8 (Biotech)
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