Re: [問題] 關於溶解DNA

看板Biotech (生命科學)作者ppqu4 (屁啦)時間19年前 (2006/04/20 15:09)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《linzhengzhan (研究所：碩士班vs博士班)》之銘言： : ※ 引述《ppqu4 (屁啦)》之銘言： : : 請問DNA在用酒精濃縮後 : : 有些protocal說可用TE buffer 溶解 : TE buffer 利於長期何保存DNA (因為tris為good buffer，EDTA為metal的螯合劑) : 可避免pH值的劇烈變化，亦可保護DNA不受DNase破壞。 : : 也有的說可以用二次水 (有的說室溫也有的說4度C) : ddH2O可用於短期的回溶；如果想溶的又好又快，可以用ddH2O，但不利於長期保存。 : 回溶的溫度 (我的經驗) : →in Room Temperture，30min~overnight →store in 4℃ : →in 37℃，1~1.5hr →操作實驗 : →in 4℃，沒試過；我用4℃是用於保存DNA的 : : 不曉得這三者有何差別? : : 而且有的還會建議說 : : 用TE buffer溶的可以37度C加熱數分鐘幫助溶解 : : 用二次水溶的可用56度C幫助溶解 : 只要DNA不denatur的話，高於常溫，應該是可以接受的 (重點是不要破壞DNA) : 溫度的高低，只是回溶的效果與時間上的關係，只要時間夠，自然就能夠回溶完全。 : : 請問為何會有溫度上的差別呢?? : : 想知道原因是什麼? : : 懇請解惑 XD : : 謝謝謝謝你的回答~ 我查到書上的說明的確也是像你說的用TEbuffer加熱37℃助溶不過問過實驗室的人幾乎全都是用ddH2O回溶然後直接冰4℃ 甚至-20℃ 卻沒聽他們說有發生不良的情況所以才覺得很好奇... 而且學長說加熱56℃幫助回溶的原因與最一開始加buffer到組織中加熱56℃的理由一樣不過我不懂的地方是如果是要使proteinase K反應的話 37℃就夠了為何需要加熱到56℃(許多實驗室甚至加熱到65℃) 是為了破菌或是抑制DNase的反應嗎? 我聽說有些人在使用primer之前也會先加熱到56℃ 不曉得是否也是同樣的道理? 另外不曉得大家是否有發生過酒精倒掉後倒扣overnight卻還不乾的情況我查過書也問過其他實驗室的做法有的是直接用speedvac 有的直接拿去加熱蒸乾還有的是再離心一次直接用pipet把剩下的水吸出來而書上是建議用毛細吸管不然就是用真空乾燥器或冷凍乾燥器不過書上有特別說明即使離心過DNA還是不會緊附在離心管壁上所以直接用pipet吸剩下水的方式是不是很不保險阿 (尤其狀況很差的情況下) XD 但如果沒有speedvac也沒有毛細吸管的話該怎麼辦... 雖然有人是說擺了兩三天還是不乾就直接加水回溶保存算了恩..以上是一些蠻細節的小問題啦每種方法都有人做..而做的人也都說好像沒差但我還是想了解這之中是否會有些原理上的差別我查過的書是molecular cloning -a laboratory manual 還有 gene cloning and DNA analysis- an introduction 都沒看到關於這些細部的解釋至於聖經molecular clone也是找不到是否可以指點一下哪裡可以查到這些方法步驟的原理說明呢? 謝謝囉~ -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.58.72 ※ 編輯: ppqu4 來自: 140.112.58.72 (04/20 15:55) ※ 編輯: ppqu4 來自: 59.104.9.66 (04/20 22:48)