Re: [問題] cloning和PCR
你的cloning概念怪怪的 (不過我也看不懂這中文敘述 可能是誤會導致)
不太確定你知不知道PCR產物不能直接transform
一來是transformation efficiency 太低
二來是transform進去 也沒用
所以cloning的順序是
1. cDNA-pcr
2. Ligate PCR product to a vector->transformation
為什麼不做很多很多次的PCR?
做PCR用的DNA polymerase沒有100%準確率
無限"放大" PCR產物的結果 會造成很多變異
產生變異為什麼不好呢?
你作這些PCR產物都有目的 多半是要表現蛋白質
隨處有變異的蛋白質->無用
Ligation到其他的vector的目的?
並不只是為了方便送到transformant裡面
單單只有一個PCR product有什麼用
當然是要vector上的promoter或是regulatory element binding site
來表現你的PCR產物
把產物放到對的地方 才是cloning的目的
※ 引述《lakerjackt.bbs@ptt.cc (NN )》之銘言：
: 我要把一段cDNA放大..就做pcr
: 然後得出的pcr product
: 然後再把pcr product tranformation到competent cell中,...
: 然後再從competent中抽出vector...再跑序列..看是否有看入..
: 從以上的過程中,我知道competent cell是能把vector放大..也就是把pcr product放大
: 但..為何不直接把pcr product再一次放大成2th pcr product??
: 請問會不會是為了方便pcr product以後若要送再insertion或ligation
: 因旁邊有restriction site..才要做cloning...
: 不然就是方便讓它能送入cell中..才做cloing..
: ??
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