Re: [問題] cloning和PCR

看板Biotech (生命科學)作者lakerjackt (NN )時間19年前 (2006/05/14 00:20)推噓0(0推 0噓 0→)

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哈....你對我產生誤會了... 我當然知道pcr product要坎入載體中...才能transformation 因為我知道我自己亂寫一通,,造成你看錯..真sorry.. 而我想知道的問題已經解決了但還是謝謝你..^^ ※ 引述《everblue.bbs@ptt3.cc (fly fly fly~)》之銘言： : 你的cloning概念怪怪的 (不過我也看不懂這中文敘述可能是誤會導致) : 不太確定你知不知道PCR產物不能直接transform : 一來是transformation efficiency 太低 : 二來是transform進去也沒用 : 所以cloning的順序是 : 1. cDNA-pcr : 2. Ligate PCR product to a vector->transformation : 為什麼不做很多很多次的PCR? : 做PCR用的DNA polymerase沒有100%準確率 : 無限"放大" PCR產物的結果會造成很多變異 : 產生變異為什麼不好呢? : 你作這些PCR產物都有目的多半是要表現蛋白質 : 隨處有變異的蛋白質->無用 : Ligation到其他的vector的目的? : 並不只是為了方便送到transformant裡面 : 單單只有一個PCR product有什麼用 : 當然是要vector上的promoter或是regulatory element binding site : 來表現你的PCR產物 : 把產物放到對的地方才是cloning的目的 : ※ 引述《lakerjackt.bbs@ptt.cc (NN )》之銘言： : : 我要把一段cDNA放大..就做pcr : : 然後得出的pcr product : : 然後再把pcr product tranformation到competent cell中,... : : 然後再從competent中抽出vector...再跑序列..看是否有看入.. : : 從以上的過程中,我知道competent cell是能把vector放大..也就是把pcr product放大 : : 但..為何不直接把pcr product再一次放大成2th pcr product?? : : 請問會不會是為了方便pcr product以後若要送再insertion或ligation : : 因旁邊有restriction site..才要做cloning... : : 不然就是方便讓它能送入cell中..才做cloing.. : : ?? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.204.138.223 ※ 編輯: lakerjackt 來自: 203.204.138.223 (05/14 00:24) ※ 編輯: lakerjackt 來自: 203.204.138.223 (05/14 00:24)