Re: [問題] cloning和PCR
謝謝大大..因你看不到推文
所以回文謝謝你..
我了解了^^
※ 引述《everblue.bbs@ptt3.cc (fly fly fly~)》之銘言：
: ※ 引述《lakerjackt.bbs@ptt.cc (NN )》之銘言：
: : 照大大這樣講...
: : 那cloning的主要目的是只有放大pcr product和出錯率降低..
: : 那請問為何做第二次時,出錯率會大增?
: 舉個例子
: 我用市面上可以proof-read的polymerase
: NEB的Phusion好了
: error rate 1/4.4x10^7
: 1th PCR (template=cDNA)
: 你PCR的序列2kb, 20個cycle
: 2000x2^19=1x10^9
: 你的polymerase要新增1x10^9 nucleotides >> 4.4x10^7
: 如果要算error的話 可能會有23.6個隨機錯誤會產生
: 我這種算法 並沒有累計cycle數
: 假設變異發生在前幾個PCR cycle
: 你的PCR產物所有的隨機錯誤可能會更多
: 所以一般人做要cloning的PCR 都會盡量減低PCR cycle數
: 少加點Mg2+
: 寧願少一點產物 也不要有錯的產物
: 照你說的 把第一次PCR產物拿來再amplify一次
: 不就是把那些隨機錯誤繼續以2倍放大..
: 並且再累計更多polymerase新加的錯誤
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