Re: [問題] 請教各位先進E. coli表現與 SDS-page的 …
※ 引述《wensing (潛力股)》之銘言:
: 感謝分享!
: : 分享一下我的經驗
: : 表現蛋白的部份應該是都差不多
: : 但是在跑膠時
: : 我會先離心(把菌離下來)
: : 然後加8M urea去破菌
: 我的蛋白質很特別,可以耐得住urea而不變性
: 那用Gu-HCl可以嗎? 會影電泳結果嗎?
用G-HCl時,跑電泳前得先沉澱
否則不能跑
: : (回溶菌泥後有可能澄清也有可能渾濁 視菌量而定)
: : 加熱到90度 10至20分鐘 跑膠
: : 可以看出有沒有表現
: : 但是不能知道是否是inclusion body
: : 白白的東西應該是菌的殘骸
: : 你sample buffer中有什麼成分?
: 我的sample buffer 就一般的成分,SDS, β-me
: : 如果只是SDS應該不足以完全破壞inclusion body
: : (上面這句話是我據經驗推測 有錯請糾正 感謝~~^^")
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